RU 2324736 C1, 20.05.2008. RU 2324737 C1, 20.05.2008. SU 1782484 A1, 23.12.1992. WO 2004081184 A2, 23.09.2004. WO 2006026537 A2, 15.06.2006. WO 9201370 A1, 06.02.1992. FRASER ET AL, THE PLANT JOURNAL, 24 (4): 551-558, 2000.
Имя заявителя:
Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН (RU)
Изобретатели:
Бурьянов Ярослав Иванович (RU) Захарченко Наталья Сергеевна (RU) Юхманова Анна Александровна (RU) Пиголева Светлана Васильевна (RU) Рукавцова Елена Борисовна (RU) Чеботарева Елена Николаевна (RU) Гаязова Аделя Райхановна (RU)
Патентообладатели:
Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН (RU)
Реферат
Кокультивируют экспланты растений со штаммом бактерии Agrobacterium tumefaciens, содержащим рекомбинантную плазмиду рВМ, несущую ген целевого продукта и свободную от селективных маркерных генов устойчивости к антибиотикам и гербицидам. Трансформированные экспланты помещают на среду, не содержащую антибиотики, для инициации побегов. Полученные побеги выращивают на свежей среде до фертильных трансгенных растений, несущих целевой ген и имеющих признаки исходного сорта, и затем ведут прямую селекцию растений по синтезируемым ими целевым продуктам. Для трансформации используют штамм Agrobacterium tumefaciens LBA4404 (pAL4404). Отбор трансформантов ведут после регенерации побегов растений иммуноферментным или вестерн-блот анализом непосредственно, анализируя экстракты молодых проростков растений, образовавшихся на питательной среде, не содержащей селективные антибиотики, и экспрессирующих ген целевого продукта. Ген целевого продукта выбирают из группы, состоящей из гена, кодирующего антиген вируса гепатита В, гена, кодирующего антимикробный пептид млекопитающих цекропин Р1, гена дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis CryIA(b) и гена бактериальной ДНК-метилтрансферазы M.EcoRII. Способ позволяет получить безмаркерные трансгенные растения. 2 н. и 5 з.п. ф-лы, 3 ил.