ПОЛЗИКОВ М.А. и др., Получение линии клеток мыши NIH/3T3 с повышенным содержанием белка ядрышка SURF-6 // Всеросс. симп. Биология клетки в культуре, С-Пб., 17-19 окт. 2006 г. Тезисы докл., Цитология. 2006, T.48, N9, с.791. RU 2296159 С2, 27.03.2007.
Имя заявителя:
Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. академиков М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН (RU)
Изобретатели:
Ползиков Михаил Александрович (RU) Зацепина Ольга Владимировна (RU)
Патентообладатели:
Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. академиков М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН (RU)
Реферат
Изобретение относится к генной инженерии и может быть использовано для продуцирования белка ядрышка SURF-6 млекопитающих. Линию клеток NIH/3T3-174 получают с помощью генетической модификации фибробластов мыши линии NIH/3T3. Модификацию проводят с помощью двух последовательных трансфекций при достижении клетками 70% конфлуентности. Первую трансфекцию осуществляют 5 мкг плазмиды pUHrT62-1, кодирующей гены устойчивости клеток к неомицину (G-418) и тетрациклинзависимого трансактиватора, и 15 мкл реагента для липосомальной трансфекции в 500 мкл среды ДМЕМ. Вторую трансфекцию проводят смесью 2.5 мкг плазмиды pBI-SURF6, несущей гены EGFP (зеленого флуоресцирующего белка) и белка SURF-6, и 2.5 мкг линейного фрагмента ДНК, кодирующей ген устойчивости к пуромицину, и 15 мкл реагента для липосомальной трансфекции в 500 мкл среды ДМЕМ. Экспрессия генов EGFP и SURF-6 находится под контролем промотора, активируемого добавлением в среду культивирования индуктора - антибиотика доксициклина. Полученная линия клеток NIH/3T3-174 способна при добавлении индуктора продуцировать белок SURF-6 на уровне, в 10-20 раз превышающем содержание белка в исходных немодифицированных фибробластах. 5 ил.
Поиск патентов
Получить полное описание патента