На данной странице представлена ознакомительная часть выбранного Вами патента

Для получения более подробной информации о патенте (полное описание, формула изобретения и т.д.) Вам необходимо сделать заказ. Нажмите на «Корзину»

Вернуться к списку

РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНКРTV241, СПОСОБ КОНСТРУИРОВАНИЯ РЕКОМБИНАНТНОЙ ПЛАЗМИДНОЙ ДНКРTV241, СПОСОБ КОНСТРУИРОВАНИЯ ПЛАЗМИДЫ, СОДЕРЖАЩЕЙ ГЕН CRY III A В СОСТАВЕ ТРАНСПОЗОНА TN917CAT, ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS THURINGIENSIS SUBSP. THURINGIENSIS, АКТИВНЫЙ ПРОТИВ КОЛОРАДСКОГО ЖУКА

Номер публикации патента: 2125091

Вид документа:  C1  Страна публикации:  RU  Рег. номер заявки:  95120271		Получить полное описание патента

Реферат

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генетической инженерии. Рекомбинантная плазмидная ДНК рТV/241, обеспечивающая экспрессию гена дельта-эндотоксина cryIII A Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, содержит полную последовательность векторной плазмиды рТV24, полную последовательность Bam HI-Bgl II - фрагментa ДНК Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis размером 2,9 т.п.н., интактный ген дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis cry IIIA, встроенный в последовательность транспозона Тп917 cat. Способ конструирования рекомбинантной плазмидной ДНК pTV241 заключается в том, что смесь ДНК плазмиды pUC19 и Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis расщеляют эндонуклеазой HindIII. Обрабатывают смесью клетки Escherichia coli JM103, отбирают бесцветные колонии на среде Мак-Конки с ампициллином. Отобранные колонии проверяют на наличие последовательностей ДНК, гомологичных соответствующим последовательностям cryIIIА гена. Из клеток одной из колоний, содержащих указанные последовательности, выделяют ДНК-плазмиду с геном cryIIIA, обозначенную рВТТ51. Плазмиду рВТТ51 расщепляют эндонуклеазами Bam HI и Bgl II. Полученные фрагменты смешивают с фрагментами ДНК плазмиды pTV24 и соединяют. Трансформируют фрагменты посредством электропорации клеток Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki. Трансформанты высевают на агаризованную среду, содержащую хлорамфеникол (Cm). Выделяют из Cm - устойчивых клеток плазмидные ДНК. Отбирают целевую рекомбинантную плазмидную ДНК pTV241. Способ конструирования плазмиды, содержащей ген cryIIIA в составе транспозона Tn917 cat, размером около 50 т.п.н., заключается в том, что рекомбинантную плазмидную ДНК pTV241 передают в клетки штамма Bacillus thuringiensis subsp. morrisoni ДС. Отбирают трансформированные клоны, устойчивые к Cm. Затем их скрещивают со штаммом Bacillus cereus, устойчивым к рифампицину (Rf). Из клеточных клонов, устойчивых к Cm и Rf, выделяют целевую конъюгативную плазмиду. На основе данной плазмиды получают штамм Bacillus thuringiensis subsp. thuringiensis IPM-37, активный против колорадского жука. Предлагаемoе изобретение позволяет получить более эффективный штамм, не только активный против колорадского жука, но и против других жесткокрылых вредных насекомых. 4 c.п. ф-лы, 1 ил.

Вернуться к списку