MAHER R.L. AND BLOOM L.B. Pre-steady-state kinetic characterization of the AP endonuclease activity of human AP endonuclease 1. J. Biol. Chem. 2007, 282, 30, 577-30, 585. MICHAEL S. BOBOLA ET AL. Apurinic/Apyrimidinic Endonuclease Activity Is Elevated in Human Adult Gliomasi, November 2001, Vol.7, 3510-3518. ANNA REDAELLI et al. AP endonucleaseactivity in humans: Development of a simple assay and analysis of ten normal individuals, Teratogenesis, Carcinogenesis, and Mutagenesis, Published Online: 7 Dec 1998 Volume 18 Issue 1, Pages 17-26. WILSON DM 3RD Incision activity of human apurinic endonuclease (Ape) at abasic site analogs in DNA., J Biol Chem. 1995 Jul 7;270(27): 16002-7. WO 9731612 A2, 04.09.1997.
Имя заявителя:
Учреждение Российской академии наук Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения РАН (ИХБФМ СО РАН) (RU)
Изобретатели:
Кузнецов Никита Александрович (RU) Коваль Владимир Васильевич (RU) Федорова Ольга Семеновна (RU)
Патентообладатели:
Учреждение Российской академии наук Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения РАН (ИХБФМ СО РАН) (RU)
Реферат
Изобретение относится к области молекулярной биологии и биохимии. Для осуществления способа определения активности апурин/апиримидин-эндонуклеазы человека запускают реакцию путем смешивания растворов субстрата и фермента в соотношении 1:1 и регистрируют изменение интенсивности флуоресценции субстрата в интервале времени 1-2000 сек. Для этого в кювете флуориметра смешивают растворы субстрата (1,0×10-6 М), Tris-HCl буфера и образца АП-эндонуклеазы человека (1,0×10-7 М, 1,0×10-8 М, 1,0×10-9 М, 1,0×10-10 М). В качестве субстрата используют двухспиральный комплекс комплементарных олигодезоксирибонуклеотидов длиной 13 или более звеньев, содержащий в центральном положении остаток 2-оксиметил-3-окси-тетрагидрофурана и несущий красители флуоресцеин и дабцил. Изменение интенсивности флуоресценции субстрата в реакционной смеси регистрируют в спектральном диапазоне 500-550 нм, возбуждение флуоресценции проводят на длине волны 494 нм. Кинетические кривые обрабатывают методом нелинейной регрессии с помощью программы DynaFit. Использование способа позволяет повысить точность и достоверность определения активности апурин/апиримидин-эндонуклеазы человека, а также отказаться от использования радиоактивно-меченного субстрата и стандартизовать единицы измерения активности в соответствии с международной системой. 1 ил.
Поиск патентов
Получить полное описание патента