ФРАНК Л.А. и др. Использование Ca2+-активируемого фотопротеина обелина как метки в иммуноферментном анализе. Иммунология, 1997, 1, с.55-57. US 6649414 B1, 18.11.2003. US 5648218 A, 15.07.1997. US 7241864 A1, 10.07.2007. US 20050214776 A1, 29.09.2005. VISOTSKI E.S. et al. Violet bioluminescence and fast kinetics from W92F obelin:structure-based proposals for the bioluminescence triggering and the identification of the emitting species. Biochemistry. 2003 May 27; 42(20):6013-24. STEPANYUK. G.A. et al. Interchange of aequorin and obelin bioluminescence color is determined by substitution of one active site residue of each photoprotein. FEBS Lett. 2005 Feb 14; 579(5):1008-14.
Имя заявителя:
Институт биофизики Сибирского отделения РАН (RU)
Изобретатели:
Борисова Василиса Валерьевна (RU) Франк Людмила Алексеевна (RU) Маркова Светлана Владимировна (RU) Высоцкий Евгений Степанович (RU)
Патентообладатели:
Институт биофизики Сибирского отделения РАН (RU)
Реферат
Изобретение относиться к области биохимии, а именно к способам проведения иммуноферментного и ДНК-гибридизационного анализа. Предлагается конъюгат для биолюминесцентного молекулярного микроанализа, полученный из фермента, соединенного с биоспецифическим реагентом, где в качестве фермента используют Са2+ зависимый фотопротеин обелин с измененным спектром биолюминесценции: рекомбинантный обелин W92F; H22E или рекомбинантный обелин Y138F. Способ одновременного определения двух аналитов биолюминесцентным молекулярным микроанализом включает в себя обработку твердой фазы биоспецифическими реагентами, отделение непрореагировавшей жидкой фазы, обработку твердой фазы ферментсодержащим конъюгатом, разделение жидкой и твердой фаз и анализ твердой фазы. При этом в качестве биоспецифического реагента для первой обработки твердой фазы используют два иммуноглобулина или один иммуноглобулин с двойной специфичностью или два разных олигонуклеотида. Конечную обработку твердой фазы проводят одновременно двумя коньюгатами, состоящими, соответственно, из рекомбинантных обелинов с разными спектрами биолюминесценции и молекул с разной биоспецифичностью, где в качестве рекомбинантных обелинов используют W92F; H22E и рекомбинантный обелин Y138F с последующим анализом на двухканальном биолюминометре с широкополосными светофильтрами. Использование данного способа позволяет более точно, быстро, универсально и технологично проводить биолюминесцентный способ молекулярного микроанализа 2 н.п. ф-лы, 3 ил.
Поиск патентов
Получить полное описание патента