WO 0104341 А1, 18.01.2001. DE 19735994 А, 25.02.1999. ЕА 12617 В1, 28.04.2008. RU 2057760 С1, 10.04.1996. Semino С.Е. Chitin oligosaccharides as candidate patterning agents in zebrafish embryogenesis, Int. J. Biol. 44, 2000, p.183-193.
Имя заявителя:
Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИСХМ Россельхозакадемии) (RU), Долгих Елена Анатольевна (RU), Долгих Вячеслав Васильевич (RU), Леппянен Ирина Викторовна (RU), Варламов Валерий Петрович (RU), Лопатин Сергей Александрович (RU)
Изобретатели:
Долгих Елена Анатольевна (RU) Долгих Вячеслав Васильевич (RU) Леппянен Ирина Викторовна (RU) Варламов Валерий Петрович (RU) Лопатин Сергей Александрович (RU)
Патентообладатели:
Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИСХМ Россельхозакадемии) (RU) Долгих Елена Анатольевна (RU) Долгих Вячеслав Васильевич (RU) Леппянен Ирина Викторовна (RU) Варламов Валерий Петрович (RU) Лопатин Сергей Александрович (RU)
Реферат
Изобретение относится к области биохимического синтеза. Способ включает биосинтез пента-N-ацетилхитопентаозы in vivo из предшественника N-ацетилглюкозамина в культуре бактерий Escherichia coli DH5a высокой плотности, с помощью экспрессируемого в клетках этих бактерий рекомбинантного фермента N-ацетилглюкозаминилтрансферазы Mesorhizobium loti 1803. Причем для осуществления биосинтеза in vivo проводят выделение, клонирование и экспрессию в Escherichia coli DH5a гена NodC Mesorhizobium loti 1803, кодирующего N-ацетилглюкозаминилтрансферазу, амплифицикацию гена NodC осуществляют с помощью специфичных праймеров и Pfu-полимеразы, в качестве матрицы для амплификации гена NodC используют ДНК, выделенную из штамма Mesorhizobium loti 1803, депонированного в коллекции ВНИИСХМ, в результате получают продукт амплификации размером 1300 п.о., амплифицированный ген NodC Mesorhizobium loti 1803 (NodC) клонируют в векторе pUC19 по сайтам BamH EcoR1 с сохранением рамки считывания, таким образом, получают плазмиду pUC19-NodC и используют ее для экспрессии гена NodC в бактериях Escherichia coli DH5, экспрессию N-ацетилглюкозаминилтрансферазы (NodC) осуществляют в штамме Escherichia coli DH5 после индукции изопропил--D-тиогалактозидом, при культивировании бактерий Escherichia coli DH5, несущих плазмиду pUC19-NodC со встроенным геном NodC Mesorhizobium loti 1803, в присутствии предшественника N-ацетилглюкозамина синтезируют пента-N-ацетилхитопентаозу, количество синтезированной пента-N-ацетилхитопентаозы с помощью фермента N-ацетилглюкозаминилтрансферазы Mesorhizobium loti 1803 составляет около 0,1-0,5 грамма на литр бактериальной культуры, с помощью метода масс-спектрометрии осуществляют анализ синтезированного вещества, который подтверждает, что синтезированное вещество является пента-N-ацетилхитопентаозой. 5 ил., 2 пр.
Поиск патентов
Получить полное описание патента